Comparação da incidência de fungos ocratoxigênicos e ocratoxina A em café com broca e sem broca

Abstract

Este estudo teve como objetivo comparar a micobiota dos grãos sadios (e sem broca), com os grãos brocados (e sem outros defeitos), de amostras de café cru, das principais regiões produtoras de Coffea arabica e C. canephora do Brasil; identificar os principais fungos ocratoxigênicos à nível de seção ou espécie; otimizar a metodologia de análise de ocratoxina A (OTA) nos grãos sadios e brocados; determinar e comparar os níveis de OTA nas amostras destes dois tipos de grãos; e determinar a atividade de água e umidade destas amostras. Foi feita a separação dos grãos de café sadios (sem defeitos) e brocados (infestados pela broca-do-café), manualmente. Para a análise micológica, foi feita uma desinfecção superficial e o plaqueamento direto no meio Ágar Dichloran Glicerol 18%. O teste de produção de OTA dos isolados de A. section Nigri e A. section Circumdati foi feito de acordo com o método ágar plug aplicado à Cromatografia de Camada Delgada (CCD). A análise de OTA nos grãos sadios e grãos brocados foi realizada passando pela etapa de limpeza e extração em coluna de imunoafinidade para OTA. A detecção e quantificação foi feita por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), com detector de fluorescência. Foram isolados um total de 590 e 1.013 fungos potencialmente produtores de OTA, nos grãos sadios e grãos brocados, respectivamente. A maioria das amostras 58 (72,5%) apresentou maior infecção nas frações de grãos brocados. Em apenas 22 (27,5%) amostras os grãos sadios tiveram maior infecção que os grãos brocados ou infecção similar. As espécies potencialmente ocratoxigênicas predominantes foram: A. section Nigri no café C. canephora (robusta) e A. section Circumdati no café C. arabica (arábica). Nos grãos sadios, de todos os isolados de A. section Nigri (169) e A. section Circumdati (413) testados, 8 (4,7%) e 278 (67,3%) foram produtores de OTA, respectivamente. Nos grãos brocados, dos 261 isolados de A. section Nigri e 728 de A. section Circumdati testados, 6 (2,3%) e 522 (70,1%) foram produtoras de OTA, respectivamente. A média de concentração de OTA foi superior nas frações de grãos brocados comparado aos grãos sadios, nas amostras do Cerrado Mineiro, São Paulo, Bahia e Espírito Santo.

The aim of this study was to compare the mycobiota of sound beans (without coffee borer beans) and coffee borer beans (without other defective beans) of Coffea arabica and C. canephora from the main Brazilian producing regions; to identify the major ocratoxigenic fungi at the level of section or species; to optimize the methodology of ochratoxin A (OTA) analysis in sound and borer coffee beans in order to determine the presence and to compare the levels of OTA in sound and borer coffee beans; to determine the water activity and moisture content of the samples. The separation of sound and borer beans was performed manually. For mycological analysis, each fraction was surface disinfected and plated directly onto Dichloran 18% Glycerol Agar (DG18) medium. For OTA production test in A. section Nigri and A. section Circumdati isolates, the agar plug technique was used and applied onto thin layer chromatography (TLC) plates. OTA of sound and borer coffee beans was analyzed using an immunoaffinity column for OTA. The detection and quantification was performed using a High Performance Liquid Chromatography with a fluorescence detector. A total of 590 and 1,013 fungi with potencial for OTA production were isolated from sound and borer coffee beans, respectively. Most of the samples 58 (72.5%) showed higher infection in the borer bean fractions. In only 22 (27.5%) had sound beans a higher infection than borer beans or similar infection. The predominant ochratoxigenic species were A. section Nigri in Coffea canephora (robusta) and A. section Circumdati in C. arabica (arabica). In sound beans, out of 169 isolates of A. section Nigri and 413 of A. section Circumdati, 8 isolates (4.7%) and 278 (67.3%) were OTA producers, respectively. In the borer beans, out of 261 strains of A. section Nigri and 728 of A. section Circumdati, 6 (2.3%) isolates and 522 (70.1%) were OTA producers, respectively. The mean OTA concentration was higher in borer beans compared to sound beans in the region of Cerrado Mineiro, São Paulo, Bahia and Espírito Santo.